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DNA结果99.9%的准确率如何得出
http://www.shqzjddna.org/      2013-07-26 10:49       来源:上海亲子鉴定中心法医物证司法鉴定所
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“这里是实验室,你跟着我们的工作人员一步一步来做,或许你就会明白DNA鉴定是怎么回事。”上海亲子鉴定中心法医物证司法鉴定所助理研究员张宇跟记者说了多遍操作流程,记者还是无法理解。随后,他让记者跟随刘军、杨丽两位实验人员进入实验室,一步步见证DNA鉴定结果是如何出炉的。  第一步:待检准备  唾液飞沫绝不能混入  走入该鉴定所实验室的大门前,记者被要求套了鞋套并换上消毒干净的服装。实验人员则全副武装:一次性的帽子、口罩、手套,一样都不能少。  进入实验区域后,记者发现了一个有趣的现象:实验室的走廊外,画着一个个醒目的前行箭头。据介绍,进入实验室的人,必须要严格按照这地上的箭头行进;而且,每进一个房间,就要换不同的衣服,谁也不可走“回头路”。“这主要是为了预防实验室细菌的交叉传染,确保DNA准确率。”杨丽说。  “帽子要戴到头发不外露的程度,口罩就不用说了,手套也要包住袖口。”刘军说,这些都是为了让检材不受到任何影响。为了说明这个问题,他举了个例子:在很多年以前,有个同事做DNA鉴定,由于没戴口罩,同事的唾液飞沫掉进了装DNA样本的小试管里。最后检出的结果里边,居然有这个同事的DNA信息。换句话说,这次实验失败了。  第二步:DNA提取  100℃下孵育10分钟逼出DNA   目前,最为常见的是通过血液进行DNA鉴定,也就是说,要采集血样做鉴定。  “试管内我们已经提前放入了DNA提取液。”杨丽说,血液标本内有红细胞、白细胞及杂质等诸多东西,提取液的作用是将DNA提取出来,并去除其他的物质。   提取完成后,要把小试管放入干式恒温器。“这一步的作用是孵育DNA,孵育环境是100℃的温度,时长是10分钟。”刘军说,通过孵育,NDA将充分暴露,更方便提取。
第三步: 冰箱冷藏  试剂和DNA样本充分混合  取样完成后,要将DNA 的提取物放到冰箱冷藏备用。等提取物冷却后,再拿出一个更小的试管,这个新试管当中有从试剂盒中调配的试剂。   这是最为费钱的一步,因为试剂盒是进口的,每次加入的试剂费用就要数百元 。在进入加样区之前,实验人员先是打开了紫外线消毒灯。“现在要对整个房间进行消毒,确保加样房间没有任何的病菌及粉尘等,实验者也尽量不要说话。” 实验人员提醒道。  试剂里边包括酶、引物等试剂,每个试管要加入0.2微升。加入试剂后,要将小试管放入小的混合器,让试剂和DNA样本充分混合。   第四步:扩增  DNA提取物不断繁殖分裂  为了能达到检测需求的量,要把小试管放入一个叫做扩增仪的仪器。把试管放入扩增仪后,里边的DNA提取物将不断繁殖、分裂。   在一般情况下,经过2-3个小时的扩增,DNA提取物的量就能达到检测量。也就是说,要真正进行DNA 检测、比对了。  第五步:检测  提取16个位点数据进行比对  检测是在一个叫做310荧光自动测序仪当中进行的,这种设备非常先进,把扩增完的小试管放入仪器后,设备会自动从试管中提取DNA提取物,然后自动选择DNA位点,分析染色体。在一般情况下,设备会自动提取16个位点,然后,系统自动将需要做亲子鉴定的两个样本进行自动比对。   根据遗传学原理,如果所有的位点遗传信息都能匹配成功,我们也就能大概说,这对父子或者母子是亲子关系。即便有一两个位点不能成功匹配,在一般情况下,也能作出否定的结论。“每个人都会有两条染色体,一条是父亲给予的,另一条是母亲给予的。在同一个点位上也会出现两条相同的数值,一个数值来自母亲,另一个数值来自父亲。如果孩子有的数值父亲和母亲的都没有,那么他们就很有可能不是亲子关系。”当然,这是最简单、最直观的看法,要判断孩子是否是亲生,还要经过更加严谨的计算。  计算时,有个亲权指数 (PI) 计算,因为在该公式类似于(p除以p+1)的模式,这个模式决定其结果不可能是整数。而且,因为世上没有绝对相同的DNA,因此大概只能算出约99.9%的准确率。
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